ხუთი ძალა:
● ინსტრუმენტი კონფიგურირებულია ნუკლეინის მჟავას ექსტრაქციისა და გაწმენდილი საფეხურით
● ინსტრუმენტი კონფიგურირებულია ულტრაბგერითი ამოღების მოდულით
● ინსტრუმენტი კონფიგურირებულია სრულად ავტომატურით
● ინსტრუმენტი კონფიგურირებულია ცვლადი ტემპერატურის გაძლიერებით
● ინსტრუმენტი კონფიგურირებულია სრულად დახურული რეაგენტის ნაკრებით
1. საჭიროა თუ არა ნუკლეინის მჟავის გამოვლენის რეაგენტების ამოღება და გაწმენდა?
ნუკლეინის მჟავის გამოვლენის პრინციპი ასეთია: პრაიმერის მოქმედებით, დნმ პოლიმერაზა გამოიყენება ჯაჭვური რეაქციის გაძლიერების შესასრულებლად შაბლონურ დნმ/რნმ-ზე (მოითხოვს NA-ს საპირისპირო ტრანსკრიფციას), შემდეგ კი გამოყოფილი ფლუორესცენტური სიგნალის რაოდენობა გამოვლინდება, რათა დადგინდეს. შეიცავს თუ არა ნიმუში გამოვლენილი პათოგენის ნუკლეინის მჟავას (დნმ/რნმ).
1) ნიმუშები, რომლებიც არ იქნა ამოღებული ან გაწმენდილი, შეიძლება შეიცავდეს ბევრ კომპონენტს, რომელიც გავლენას ახდენს საბოლოო შედეგზე: ნუკლეაზა (რომელსაც შეუძლია დაშალოს სამიზნე ნუკლეინის მჟავა და გამოიწვიოს ცრუ უარყოფითი), პროტეაზა (რომელსაც შეუძლია შეამციროს დნმ პოლიმერაზა და გამოიწვიოს ცრუ უარყოფითი), მძიმე მეტალი მარილი (რაც იწვევს სინთაზას ინაქტივაციას და იწვევს ცრუ დადებითს), ძალიან მჟავე ან ძალიან ტუტე PH (რაც შეიძლება გამოიწვიოს რეაქციის წარუმატებლობა), არასრული რნმ (რაც იწვევს ცრუ უარყოფით საპირისპირო ტრანსკრიფციის უკმარისობას).
2) ზოგიერთი ნიმუშის პირდაპირი გაძლიერება ძნელია: გრამდადებითი და ზოგიერთი პარაზიტი, მათი სქელი უჯრედის კედლებისა და სხვა სტრუქტურების გამო, თუ ისინი არ გაივლიან ნუკლეინის მჟავას ექსტრაქციისა და გაწმენდის პროცესს, ექსტრაქციისგან თავისუფალი ნაკრები შეიძლება ვერ შესრულდეს ასეთ შემთხვევებში. ნიმუშები.
ამიტომ, რეკომენდებულია ნუკლეინის მჟავას ექსტრაქციის საფეხურით კონფიგურირებული სატესტო ნაკრები ან ინსტრუმენტის შერჩევა.
2. ქიმიური ექსტრაქცია თუ ფიზიკური ულტრაბგერითი ფრაგმენტაციის ექსტრაქცია?
ზოგადად რომ ვთქვათ, ქიმიური ექსტრაქცია შეიძლება გამოყენებულ იქნას წინასწარი დამუშავებისა და გაწმენდის უმეტესი ნაწილისთვის.თუმცა, სქელკედლიან გრამდადებით ბაქტერიებში და ზოგიერთ პარაზიტში, ასევე ხდება ის ფაქტი, რომ ქიმიური ექსტრაქცია ვერ მიიღებს ეფექტურ ნუკლეინის მჟავას შაბლონებს, რაც იწვევს ცრუ უარყოფით გამოვლენას.გარდა ამისა, ქიმიური ექსტრაქცია ხშირად იყენებს ძლიერ აგენტებს, თუ გამორეცხვა არ არის საფუძვლიანი, ადვილია ძლიერი ტუტეების შეყვანა რეაქციის სისტემაში, რაც იწვევს არაზუსტ შედეგებს.
ულტრაბგერითი ფრაგმენტაცია იყენებს ფიზიკურ დამსხვრევას, რომელიც წარმატებით გამოიყენა GeneXpert-მა, წამყვანმა საწარმომ POCT-ის სფეროში ადამიანის გამოყენებისთვის და აქვს აბსოლუტური უპირატესობა ზოგიერთი რთული ნიმუშის ნუკლეინის მჟავას ექსტრაქციაში (როგორიცაა Mycobacterium tuberculosis).
ამიტომ, რეკომენდებულია ნუკლეინის მჟავას ექსტრაქციის საფეხურით კონფიგურირებული სატესტო ნაკრები ან ინსტრუმენტის შერჩევა.და ოპტიმალურია თუ არსებობს ულტრაბგერითი მოპოვების მოდული.
3. მექანიკური, ნახევრად ავტომატური და სრულად ავტომატური?
ეს არის შრომის ღირებულებისა და მუშაობის ეფექტურობის პრობლემა.ამჟამად შინაური ცხოველების საავადმყოფოები საკმარისი პერსონალის გარეშე და ნუკლეინის მჟავის მოპოვება და გამოვლენა არის სამუშაო, რომელიც მოითხოვს გარკვეულ უნარებსა და გამოცდილებას.ეჭვგარეშეა, რომ სრულად ავტომატური ნუკლეინის მჟავების მოპოვებისა და გამოვლენის მანქანა შესანიშნავი არჩევანია.
4. მუდმივი ტემპერატურის გაძლიერება თუ ცვლადი ტემპერატურის გაძლიერება?
გაძლიერების რეაქცია არის ნუკლეინის მჟავის გამოვლენის რგოლი და ამ ბმულში ჩართული პროფესიული ტექნოლოგია რთულია.უხეშად რომ ვთქვათ, ფერმენტები გამოიყენება ნუკლეინის მჟავის გასაძლიერებლად.გაძლიერების პროცესში აღმოჩენილია გაძლიერებული ფლუორესცენციის სიგნალი ან ჩაშენებული ფლუორესცენციის სიგნალი.ზოგადად რომ ვთქვათ, რაც უფრო ადრე ჩნდება ფლუორესცენციის სიგნალი, მით მეტია ნიმუშის სამიზნე გენის შემცველობა.
მუდმივი ტემპერატურის გაძლიერება არის ნუკლეინის მჟავის გაძლიერება ფიქსირებულ ტემპერატურაზე, ხოლო ცვლადი ტემპერატურის გაძლიერება არის ციკლური გაძლიერება მკაცრად დენატურაცია-ანილირება-გაფართოების მიხედვით.მუდმივი ტემპერატურის გაძლიერების დრო განხორციელდა, ხოლო ტემპერატურის ცვლადი გაძლიერების დრო დიდ გავლენას ახდენს ხელსაწყოს ტემპერატურის აწევისა და დაცემის სისწრაფეზე (დღესდღეობით, ბევრ მწარმოებელს შეუძლია გააკეთოს გაძლიერების 40 ციკლი დაახლოებით 30 წუთში).
თუ ლაბორატორიული პირობები კარგია და ზონირება მკაცრია, გონივრული იქნება იმის თქმა, რომ ამ ორს შორის სიზუსტის სხვაობა დიდი არ იქნება.თუმცა, ცვლადი ტემპერატურის გაძლიერება შედარებით მოკლე დროში ასინთეზებს მეტ ნუკლეინის მჟავას პროდუქტს.ლაბორატორიებისთვის მკაცრი ზონირებისა და პროფესიონალი მომზადების პერსონალის გარეშე, ნუკლეინის მჟავას აეროზოლის გაჟონვის რისკი უფრო დიდი იქნება, ცრუ დადებითი ჩნდება გაჟონვის შემდეგ და რაც უკიდურესად ძნელია აღმოფხვრა.
გარდა ამისა, მუდმივი ტემპერატურის გაძლიერება ასევე უფრო მიდრეკილია არასპეციფიკური გაძლიერებისკენ, როდესაც ნიმუში რთულია (რეაქციის ფარდობითი ტემპერატურა დაბალია და რაც უფრო მაღალია გაფართოების ტემპერატურა, მით უკეთესია პრაიმერის დამაკავშირებელი სპეციფიკა).
რაც შეეხება მიმდინარე ტექნოლოგიას, ცვლადი ტემპერატურის გაძლიერება უფრო საიმედოა.
5. როგორ ავიცილოთ თავიდან ნუკლეინის მჟავას გამაძლიერებელი პროდუქტების გაჟონვის რისკი?
ამჟამად, ბევრი მწარმოებელი ირჩევს ჯირკვლის ტიპის PCR მილს, როგორც ნუკლეინის მჟავას რეაქციის მილს, რომელიც დალუქულია ხახუნის შედეგად, ხოლო ტემპერატურის დენატურაცია ცვლადი ტემპერატურის დენატურაციისას ცვლადი ტემპერატურის PCR გაძლიერებისას აღწევს 90 გრადუსს.
ცენტიგრადი .გაფართოების განმეორებითი პროცესი სიცხით და შეკუმშვა სიცივით არის დიდი გამოწვევა PCR მილის დალუქვისთვის და ჯირკვლის ტიპის PCR მილის გაჟონვა შედარებით ადვილია.
რეაქციის პროდუქტის გაჟონვის თავიდან აცილების მიზნით რეაქციის მიღება სასურველია მთლიანად დალუქული ნაკრებით/მილით.შესანიშნავი იქნება, თუ შეიქმნება სრულად დალუქული ნაკრები ნუკლეინის მჟავის მოპოვებისა და გამოვლენისთვის.
ასე რომ, New Tech-ის ახალ სრულად ავტომატურ ნუკლეინის მჟავების მოპოვებისა და გამოვლენის მანქანას აქვს ზემოთ მოყვანილი ხუთი ოპტიმალური არჩევანი.
გამოქვეყნების დრო: აგვისტო-09-2023
